SYPRO Orange 蛋白凝膠染色劑

SYPRO Orange protein gel stain

產(chǎn)品簡介：

SYPRO Orange蛋白凝膠染色劑是一種靈敏的蛋白染色劑，用于快速簡便地檢測電泳凝膠中的蛋白質(zhì)。

1D SDS-PAGE凝膠蛋白染色雖非選擇性，但具有特異性。在變性條件下，染料會與SDS-蛋白膠束結(jié)合，而非直接與蛋白質(zhì)結(jié)合。細(xì)菌脂多糖僅呈現(xiàn)弱染色反應(yīng)，核酸則完全不顯色。這種特異性使SYPRO Orange在保持同等靈敏度的同時，相比傳統(tǒng)銀染法更具優(yōu)勢。 SYPRO Orange可檢測低至4-8納克/條帶的蛋白質(zhì)，分子量檢測下限可達(dá)約6.5千道爾頓，其靈敏度與銀染法相當(dāng)，但優(yōu)于考馬斯亮藍(lán)。

染色過程快速簡便，無需預(yù)先固定。染色后通常在染液中浸泡30-60分鐘，隨后用7.5%醋酸快速沖洗即可拍攝凝膠照片。檢測與記錄均通過300納米紫外透射儀或激光掃描儀完成。其熒光強度與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系，覆蓋三個數(shù)量級，且比銀染或考馬斯染色法更優(yōu)。

SYPRO在凝膠電泳過程中，可向陰極運行緩沖液中加入橙色染料對蛋白質(zhì)進(jìn)行染色。該染料隨SDS電場前沿遷移，可對所有蛋白質(zhì)進(jìn)行染色。蛋白質(zhì)無法進(jìn)行預(yù)染色，因為變性緩沖液中的SDS會干擾染色。若需在非變性凝膠上檢測蛋白質(zhì)，可先用SDS溶液浸泡蛋白質(zhì)進(jìn)行染色前處理。若使用SYPRO Orange對2D凝膠和IEF凝膠進(jìn)行染色，靈敏度會顯著降低。

SYPRO Orange蛋白凝膠染色劑以5000X DMSO濃縮溶液形式提供。

保存條件: 

儲存于4℃或-20℃避光環(huán)境下可穩(wěn)定保存一年。

用緩沖液或稀醋酸稀釋的溶液需置于無洗滌劑的潔凈玻璃或塑料瓶中，避光保存于4℃環(huán)境中三個月。

工作液制備：

1：電泳后染色時，將母液用7.5%（v/v）乙酸溶液稀釋5000倍，并充分混勻。取50μl母液，可配制足夠染色五個聚丙烯酰胺迷你凝膠的工作液。

2：電泳期間染色時，將母液用陰極運行緩沖液稀釋5000倍。

產(chǎn)品使用：

一：電泳后染色

1.      取1 X染色液，加入無洗滌劑的潔凈玻璃或聚丙烯染色培養(yǎng)皿中。使用每種標(biāo)準(zhǔn)迷你凝膠約需50毫升，最多可使用750 ml用于較大凝膠。

2.      將凝膠置于染色液中，并用鋁箔覆蓋以防止染色過程中光照。

3.      將樣本置于平臺式振蕩器上，輕柔振蕩10-60分鐘，或持續(xù)振蕩至染色效果最佳。延長染色時間雖不會提升靈敏度，但可能增加背景熒光。

4.      用7.5%乙酸溶液沖洗凝膠1分鐘，以去除凝膠上的多余染料。

5.      將凝膠直接放置在透光片上進(jìn)行拍攝。切勿使用保鮮膜，因為保鮮膜在SYPRO Orange存在時會比正常情況更強烈地自發(fā)熒光。若凝膠帶有塑料背襯，應(yīng)將其移除，否則可能導(dǎo)致染料附著，從而產(chǎn)生高背景。

6.      若使用激光掃描儀，采用氬激光器的儀器能獲得最佳效果。

二：電泳期間的染色

1.      將原液用陰極運行緩沖液稀釋5000倍。SDS濃度不得超過0.05%，以維持變性條件，同時盡量減少對靈敏度和背景的影響。

2.      樣品上樣后，立即加入儀器。切勿混勻，因為樣品緩沖液中的SDS會與染料發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致靈敏度下降。

3.      按正常方式運行gel。

4.      將凝膠置于7.5%乙酸溶液中浸泡15-40分鐘，以去除凝膠中的多余染料。

注意事項：

1.      SYPRO Orange蛋白凝膠染色劑是通過與變性蛋白結(jié)合的SDS相互作用實現(xiàn)的。運行緩沖液中SDS濃度不得超過0.05%。該濃度不會影響分辨率，且能加快蛋白質(zhì)染色速度。為獲得最佳效果,SDS儲備液和運行緩沖液應(yīng)新鮮配制。

2.      染色液最多可使用四次，但每次使用后染料會逐漸流失，導(dǎo)致靈敏度降低。

3.      若目標(biāo)蛋白體積過小或使用低濃度凝膠時，將染色液中的乙酸濃度提升至10%可顯著提高蛋白保留率，且不會影響檢測靈敏度。

4.      長時間暴露在紫外光下（數(shù)分鐘）會導(dǎo)致光漂白。若發(fā)生光漂白，可將凝膠重新置于染色液中進(jìn)行二次染色。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。