C11 BODIPY 581/591 脂質(zhì)過氧化熒光探針

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

C11 BODIPY 581/591是一種脂溶性的比率型熒光探針，在模式膜系統(tǒng)和活細(xì)胞內(nèi)用來指示脂質(zhì)過氧化和抗氧化性能。

C11 BODIPY 581/591具優(yōu)秀的特征：①發(fā)射波長(zhǎng)在電磁波譜的可見光區(qū)域，非氧化態(tài)（591nm）和氧化態(tài)（510nm）兩種形式的光譜能夠很好的分開；②具高量子產(chǎn)量，正因如此，使用低標(biāo)記濃度即可，確保對(duì)膜產(chǎn)生最低的干擾，且維持良好的信噪比；③具有良好的光穩(wěn)定性，產(chǎn)生很低的熒光偽影；④基本上對(duì)環(huán)境變化比如pH或溶劑極性不敏感；⑤親脂性，輕松進(jìn)入膜；⑥一旦氧化，探針保持親脂性，且不會(huì)自發(fā)地離開脂質(zhì)雙分子層；⑦非氧化態(tài)和氧化態(tài)定位在脂質(zhì)雙分子層內(nèi)兩個(gè)不同的區(qū)域，一種位于淺層（離雙分子層中心距離為18?），一種位于深層（離雙分子層中心距離為< 7.5?）；⑧高達(dá)50μM的濃度對(duì)大鼠成纖維細(xì)胞無毒性；⑨對(duì)各種氧自由基和過氧亞硝酸鹽靈敏，但對(duì)超氧化物、一氧化氮、過渡鐵離子和氫過氧化物不靈敏；⑩其對(duì)氧化的靈敏度與內(nèi)源性脂肪?；鶊F(tuán)相當(dāng)。C11 BODIPY 581/591可用來定量鐵死亡。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO.：217075-36-0

2）化學(xué)名：(T-4)-difluoro[5-[[5-[(1E,3E)-4-phenyl-1,3-butadien-1-yl]-2H-pyrrol-2-ylidene-κN]methyl]-1H-pyrrole -2-undecanoato(2-)-κN1]-borate(1-), monohydrogen

3）分子式：C30H35BF2N2O2

4）分子量：504.4

5）純度：≥95%

6）激發(fā)波長(zhǎng)：581nm（還原型），500nm（氧化型）

7）發(fā)射波長(zhǎng)：591nm（還原型），510nm（氧化型）

8）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，2年有效。

產(chǎn)品使用：

1.儲(chǔ)存液制備和保存

將低溫保存的1mg C11 BODIPY 581/591（MW:504.4）置于室溫回溫至少20min，低速離心后加入一定量的無水DMSO配制成適量濃度的母液，比如制備10mM存儲(chǔ)液（往1mg 粉末加入0.1983mL的 DMSO，充分溶解即可）。根據(jù)單次用量將儲(chǔ)存液分裝，建議將儲(chǔ)存液-20℃～-80℃避光保存。避免反復(fù)凍融。也需注意溶液內(nèi)濕度的逐漸積累會(huì)隨著時(shí)間引起探針聚集，從而務(wù)必干燥保存儲(chǔ)存液。

2.工作液的制備和保存

在無血清細(xì)胞培養(yǎng)中稀釋儲(chǔ)備液,用適當(dāng)?shù)木彌_液(PBS)或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋10 mM儲(chǔ)存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為2-50uM。(【注】根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛龋韵碌钠鹗疾僮鳁l件僅作參考，可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整BODIPY C11 581/591工作液的濃度。)

3.細(xì)胞染色

3.1 細(xì)胞制備：

懸浮細(xì)胞：4℃，1000g離心3-5分鐘，棄上清。PBS洗滌2次，每次5分鐘。

貼壁細(xì)胞：棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶解離細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液。在 4°C 下以 1000 g 離心 3-5 分鐘，然后棄去上清液。PBS洗2次，每次5分鐘。

3.2  加入1 mL BODIPY 581/591 C11工作液，室溫孵育30分鐘。

3.3  4℃，400 g離心3-4分鐘，棄上清。

3.4  PBS洗滌2次，每次5分鐘。

3.5  用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS重懸細(xì)胞，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀。

4.應(yīng)用示例（僅做參考）

4.1.流式檢測(cè)法：

為了去除多余的染料，用PBS洗滌細(xì)胞兩次以上，之后用胰酶消化，重懸在含5% FBS的PBS中，用流式細(xì)胞儀，在488nm-565nm激光器激發(fā)，在FL1通道測(cè)量505nm-550nm對(duì)應(yīng)的信號(hào)，在FL2通道測(cè)量580nm以上的信號(hào)。當(dāng)C11 BODIPY 581/591的不飽和丁二烯部分在細(xì)胞膜內(nèi)與活性氧（ROS）發(fā)生氧化還原反應(yīng)，導(dǎo)致其最大發(fā)射熒光從591nm紅移至510左右，并且與脂質(zhì)活性氧的產(chǎn)生成正比。

4.2.共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)法：

同樣需要用PBS洗滌細(xì)胞兩次以上，利用共聚焦熒光顯微鏡，分別用488nm-565nm激光器激發(fā)，收集相關(guān)熒光信號(hào)圖像，根據(jù)測(cè)定的熒光信號(hào)算數(shù)平均值±SEM，用以量化分析脂質(zhì)過氧化細(xì)胞。未氧化的C11 BODIPY 581/591呈現(xiàn)紅色，氧化的呈綠色。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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